### 背景介绍

裸露的RNA作为带负电荷的亲水性大分子，由于细胞膜的静电排斥，难以顺利进入细胞，并且易受到广泛存在的RNA酶的快速降解。因此，为了使RNA能顺利进入细胞，必须提供保护性的外壳。细胞膜的主要成分为脂质，利用脂质囊泡封装RNA，可以穿透细胞膜并将RNA释放到细胞质中。这种囊泡通常采用带正电的脂质，以便于结合带负电的RNA。然而，基于永jiu性阳离子脂质所构成的囊泡可能因与带负电的细胞膜产生静电相互作用而引发细胞毒性，因此，脂质结构应能够响应内体酸性环境，从而带正电荷。

### 脂质纳米粒结构

脂质纳米粒（LNP）通常由四种关键成分构成：可离子化的阳离子脂质、磷脂（两性离子脂质）、胆固醇和PEG化脂质。LNP作为mRNA的传递系统，其作用机制包含多个步骤，以确保mRNA安全有效地传递到目标细胞并表达相应蛋白。在LNP中，能电离的阳离子脂质扮演着重要角色，在自组装成LNP的过程中，负载带负电的RNA；在中性pH条件下，这些阳离子脂质不带电，以最大程度减少细胞毒性；而在细胞吸收后，它们会再次带上正电荷，从而促进内体的逃逸，尤其在内体pH降低时。胆固醇和PEG类脂质的变体可以调节LNP的物理性质、纳米结构及最终的功能表现。而两性离子磷脂通常被称为“辅助脂质”。LNP在保护mRNA、促进细胞内转递及激活免疫反应中发挥着至关重要的作用。

### LNP转染实验步骤

以下转染步骤为6孔板单孔参考条件。其他培养形式请参考表1。

1. mRNA预混液制备：将25μg的mRNA（浓度为1μg/μL）与60μL的Buffer混合。
2. mRNA-easyLNP复合物制备：将625μL的mRNA预混液与625μL的easyLNP纳米混悬液混合，涡旋2-3秒，充分混匀。
3. 加入细胞：将125μL的mRNA-easyLNP复合物加入细胞，轻轻摇晃以使其均匀分散。
4. 分析时间：培养24-48小时后进行分析。

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